产品货号：
MT0239
中文名称：
TGIRT-III反转录酶
英文名称：
TGIRT-III Reverse Transcriptase
产品规格：
500pmol
发货周期：
1～3天
产品价格：
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TGIRT-III RTase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性，能快速合成cDNA，该酶具有强的链转换活性（Switch）。因此该酶可用于tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头（template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。TGIRT-III RTase具有极强的延伸性能，因此更易获得全长的cDNA。除此外，该酶具有的强switch活性，使得可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库（SMART-Seq）。该酶的反应温度为37～55℃，最佳反应温度为50℃。
| 组分 | 规格 |
| TGIRT-III RTase(10pmol/μL) | 50μL |
| 5×TGIRT Buffer | 0.5mL |
| 100mM DTT | 100μL |
| 10×Duplex Buffer | 0.5mL |
保存：-20℃，有效期2年。
- 超纯dNTP混合物(货号：MT0036)；
- RNase抑制剂(货号：MT0014)；
- 5M NaOH；
- 5M HCl；
- R1R2 comp DNA：5'-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTN-3'；
- R1R2 RNA：5'-rArGrArUrCrGrGrArArGrArGrCrArCrArCrGrUrCrUrGrArArCrUrCrCrArGrUrCrArC/-C3 Spacer/-3'
一、标准逆转录
- 按下表配制反应体系：
成分 用量 RNA 1～1000ng 10μM反转录引物 0.5μL 5×TGIRT Buffer 4μL 100mM DTT 1μL 10mM each dNTPs 2μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL TGIRT-III RTase (10pmol/μL) 1μL RNase-Free H2O 至20μL - 混合均匀后50℃条件下反应10～60min。
- 由于TGIRT-III具有极快的转录速度，多数情况下使用5min即可获得目标cDNA。
- 制备DNA/RNA退火Duplex
- 配制反应体系：
成分 用量 10×Duplex Buffer 2μL 10μM R1R2 comp DNA 2μL 10μM R1R2 RNA 2μL RNase-Free H2O 至14μL - 混合均匀后82℃ 2min，逐步降温到25℃，形成退火DNA/RNA Duplex，此时浓度为1μM。
- 配制反应体系：
- 进行Template-Switch反应
- 配制反应体系
成分 用量 5×TGIRT Buffer 4μL 100mM DTT 1μL 10mM each dNTPs 2.5μL RNase Inhibitor (40U/μL) 1μL 1μM DNA/RNA Duplex 1μL (1pmol) TGIRT-III RTase(10pmol/μL) 1μL(10pmol) RNA ＜1pmol RNase-Free H2O 至20μL - 混合均匀后50℃条件下反应60min。
- 配制反应体系
- 失活反应
向反应体系中加入1μL的5M NaOH，并于95℃孵育2min（过程时间的热变性可能会导致cDNA断裂损伤），孵育完毕后立即加入1μL的5M HCl进行碱中和。 - Template-Switching原理
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